Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Готовят контрольную пробу, используя 1 мл воды Р.
Доводят объем в каждой пробирке до 1 мл водой Р. В каждую пробирку прибавляют 1 мл (292 г/л) раствора кислоты хлористоводородной Р. Закрывают пробирки пробками и помещают в водяную баню на 1 ч. Охлаждают до комнатной температуры. В каждую пробирку добавляют 0,05 мл (5 г/л) раствора тимолфталеина Р в спирте Р. Прибавляют раствор 200 г/л натрия гидроксида Р до голубого окрашивания, а затем раствор 1 М кислоты хлористоводородной до
обесцвечивания раствора. Доводят объем в каждой пробирке до 10 мл водой Р (нейтрализованные гидролизаты).
Во вторую серию градуированных пробирок объемом 10 мл вносят 1 мл каждого нейтрализованного гидролизата. В каждую пробирку добавляют 1 мл ацетилацетонового реактива (смесь, приготавливаемая непосредственно перед использованием - 1 объем ацетилацетона Р и 50 объемов раствора 53г/л натрия карбоната безводного Р). Закрывают пробирки пробками и помещают на водяную баню при температуре 90 C на 45 мин. Охлаждают до комнатной температуры. В каждую пробирку добавляют 2,5 мл спирта Р и 1,0 мл раствора диметиламинобензальдегида (приготавлитвают непосредственно перед использованием: растворяют 0,8 г диметиламинобензальдегида Р в 15 мл спирта Р, добавляют 15 мл кислоты хлористоводородной Р) и доводят объем в каждой пробирке до 10 мл спиртом Р. Пробирки закрывают, содержимое перемешивают переворачивая пробирки и оставляют в темном месте на 90 мин. Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны 530 нм, используя контрольную пробу в качестве раствора сравнения. Строят градуировочный график на основании оптических плотностей для 4 стандартных растворов и соответствующего содержания гексозамина и определяют значение количества гексозамина в исследуемом растворе.
2.5.21. МЕТИЛПЕНТОЗЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ
Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5 мг/мл сухого полисахарида используют мерную колбу необходимого объема. Содержимое контейнера количественно переносят в колбу и разводят до необходимого объема водой Р. Раствор разводят таким образом, чтобы объемы, предназначенные для тестирования, содержали от 2 мкг до 20 мкг рамнозы (метилпентозы). В три пробирки помещают 0,25 мл, 0,50 мл и 1,0 мл разведенного раствора.
Стандартные растворы. Разводят 0,100г рамнозы Р в 100мл воды Р (основной раствор, содержащий 1г/л метилпентозы). Непосредственно перед использованием разводят 1 мл основного раствора до 50 мл водой Р (рабочая концентрация 20мг/л метилпентозы). В 5 пробирок помещают 0,10 мл, 0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл и 1,0 мл рабочей концентрации.
Готовят контрольную пробу с использованием 1 мл воды Р
Объем в каждой пробирке доводят до 1 мл с использованием воды Р. Пробирки помещают в ледяную воду, прибавляют по каплям с постоянным помешиванием по 4,5 мл охлажденной смеси, состоящей из одного объема воды Р и 6 объемов кислоты серной Р. Пробирки нагревают до комнатной температуры и помещают на водяную баню на несколько минут. Охлаждают до комнатной температуры. Добавляют в каждую пробирку 0,10 мл раствора 30 г/л цистеин гидрохлорида Р приготовленного непосредственно перед применением. Взбалтывают и дают отстояться в течение 2 ч.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны 396 нм и 430 нм, используя контрольную пробу в качестве раствора сравнения. Для каждого раствора рассчитывают разницу между оптической плотностью, измеренной при длине волны 396 нм и оптической плотностью, измеренной при длине волны 430 нм. Строят градуировочный график на основании разницы оптических плотностей для 5 стандартных растворов и соответствующей концентрации метилпентозы, а также строят график концентрации метилпентозы в исследуемом растворе для каждого тестируемого объема. Рассчитывают среднюю величину по трем значениям.
2.5.22. УРОНОВЫЕ КИСЛОТЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ
Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5 мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема. Переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до необходимого объема водой Р. Раствор разводят таким образом, чтобы объемы, предназначенные для исследования, содержали от 4 мкг до 40 мкг глюкуроновой кислоты (уроновых кислот). В 3 пробирки помещают 0,25 мл, 0,50 мл и 1,0 мл разведенного раствора.
Стандартные растворы. Растворяют 50 мг натрия глюкуроната Р в 100 мл воды Р (основной раствор, содержащий 0,4 г/л глюкуроновой кислоты). Непосредственно перед использованием разводят 5 мл основного раствора до 50 мл, используя воду Р (рабочая концентрация глюкуроновой кислоты 40 мг/л). В 5 пробирок помещают 0,10 мл, 0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл, и 1,0 мл рабочей концентрации.
Готовят контрольную пробу, используя 1 мл воды Р.
Доводят объем в каждой пробирке до 1 мл водой Р. Помещают пробирки в ледяную воду и, постоянно помешивая, по каплям добавляют в каждую пробирку по
5.0 мл боратного раствора Р. Закрывают пробирки пробками и помещают на 15 мин на водяную баню. Охлаждают до комнатной температуры. В каждую пробирку добавляют 0,20 мл раствора 1,25 г/л карбазола Р в этаноле Р. Закрывают пробирки пробками и помещают на 15 мин на водяную баню. Охлаждают до комнатной температуры. Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны 530 нм, используя контрольную пробу в качестве раствора сравнения.
